محیط های کشت میکروبی

این محیط برای جداسازی، کشت و تشخیص فعالیت های همولیتیک استرپتوکوک ها و سایر میکرو ارگانیسم ها مورد استفاده قرار می گیرد. محیط کشت بلاد آگار بیس محیط کشت Blood Agar Base این محیط برای جداسازی، کشت و تشخیص فعالیت های همولیتیک استرپتوکوک ها و سایر میکرو ارگانیسم ها مورد استفاده قرار می گیرد. این محیط با داشتن عضله قلبی، پپتون کازئین و عصاره مخمر باعث تامین نیتروژن، کربن، اسید های آمینه و ویتامین ها می شود و همچنین حاوی کلرید سدیم برای تعادل اسمزی و آگار جهت جامد کردن محیط است. خون نیز در این محیط به عنوان فاکتور رشد برای باکتری های سخت رشد استفاده می شود و مبنای تعیین واکنش های همولیتیک است. الگو های همولیتیک ممکن است با توجه به منبع خون حیوانی یا نوع محیط پایه مورد استفاده متفاوت باشد.

مخفف شده محیط کشت Nutrient Agar می باشد. این محیط کشت همانند سایر محیط کشت های دیگر دارای یکسری از ویژگی ها می باشد که می تواند برای یک آزمایش مناسب باشد . محیط کشت نوترینت یک ماده غذایی عمومی برای کشت میکروب ها و همچنین رشد طیف وسیعی از ارگانیسم های غیر سریع می باشد آگار مغذی محبوب است زیرا می تواند انواع مختلفی از باکتری ها و قارچ ها را رشد دهد و حاوی بسیاری از مواد مغذی مورد نیاز برای رشد باکتری ها است.

طرز تهیه محیط کشت نوترینت آگار

• 28  گرم از پودر محیط کشت را  به 1000 میلی لیتر آب مقطر یا دیونیزه اضافه می شود.

• سپس صبر کنید تا محیط کاملا حل شود.

• سپس محیط حل شده در فشار 15 پوند (121 درجه سانتیگراد) به مدت 15 دقیقه اتوکلاو می شود.

• پس از اتمام فرآیند اتوکلاو ، ارلن را خارج کرده و در دمای حدود 40-45 درجه سانتیگراد سرد کنید.

• در صورت تمایل به غنی سازی ، می توان پس از فرآیند اتوکلاو ، خون یا مایعات بیولوژیکی اضافه کرد.

• سپس محیط در صفحات استریل پتری تحت شرایط استریل ریخته می شود.

• پس از جامد شدن محیط ، صفحات را می توان برای مدت چند دقیقه در حرارت کمتری در اجاق هوای گرم قرار داد تا رطوبت موجود در صفحات قبل از استفاده از بین برود.

  که مخفف آن محیط کشت NB می باشد یکی از انواع مختلف محیط کشت های است که دارای فرمول وساختار متفاوتی از سایر محیط کشت ها می باشد و ازآن برای آزمایش در یک محیط مورد استفاده قرار می گیرد.

دستورالعمل تهیه محیط کشت نوترینت براث

•  13 گرم از محیط کشت نوترینت را در یک لیتر آب تصفیه شده حل کنید.

• ترکیب را کاملاً مخلوط کنید.

•  اتوکلاو در دمای 121 درجه سانتیگراد به مدت 15 دقیقه انجام دهید.

که به انگلیسی Luria broth نوشته می شود در واقع یک ماده غذایی غنی از مواد مغذی است که معمولاً برای کشت باکتری در آزمایشگاه مورد استفاده قرار میگیرد افزودن آگار به LB منجر به تشکیل ژلی می شود که باکتری ها می توانند روی آن رشد کنند چرا که آنها قادر به هضم آگار نیستند اما می توانند از LB درون بدن تغذیه کنند.

روش ساخت و تهیه محیط کشت لوریا برتانی

• 22 گرم از پودر را در 1 لیتر آب مقطر  حل کنید.

•  LB agar  را به غلظت نهایی 1.5٪ اضافه کنید.

• مخلوط را تا نقطه جوش گرم کنید تا آگار حل شود.

• در 15psi ، از 121-124 درجه سانتیگراد به مدت 15 دقیقه اتوکلاو شود.

یک محیط کشت مرجع میکروبی برای کشت باکتری E. coli است. LB براث غنی از مواد مغذی حاوی پپتیدها، اسیدهای آمینه، ویتامین‌های محلول در آب و کربوهیدرات‌ها است. محیط کشت (LB Broth) در مطالعات ژنتیک مولکولی در محیط آزمایشگاهی استفاده می‌شود.  این محیط برای رشد و نگهداری سویه اشریشیا کلی استفاده می‌شود. این محیط کشت یک محیط غنی از نظر غذایی است که برای رشد کشت‌های خالص سویه‌های نوترکیب طراحی شده است. باکتری E. coli در محیط کشت LB براث در فاز لگاریتمی تأخیری رشد می‌کند. این ماده به‌عنوان یک محیط کشت برای coli ،Pseudomonas putida KT2440 ، parahaemolyticus Vibrio و نمونه‌های خاکی برای جداسازی گونه‌های باسیلوس استفاده شده است. مناسب برای کشت غیرانتخابی سویه‌های coli برای کلونینگ، تولید پلاسمید و تولید پروتئین‌های نوترکیب. در صورت افزودن آنتی‌بیوتیک‌های مناسب، برای کشت انتخابی نیز مناسب است.

دستورالعمل تهیه محیط کشت LB براث

•  20 گرم از محیط کشت را در یک لیتر آب تصفیه شده حل کنید.

• ترکیب را کاملاً مخلوط کنید.

•  اتوکلاو در دمای 121 درجه سانتیگراد به مدت 15 دقیقه انجام دهید.

 برای جدا سازی، شمارش و کشت از گونه های لاکتو باسیلوس به کار می رود. حاوی پپتون و دکستروز هستند که نیتروژن، کربن و سایر عناصر لازم برای رشد را تامین می کنند. Polysorbate80 ، استات، منیزیم و منگنز عوامل رشد را برای کشت انواع لاکتو باسیلوس فراهم می کند. همچنین مواد ذکر شده ممکن است رشد برخی از ارگانیسم ها را به غیر از لاکتو باسیل ها مهار کند. این محیط صرفا برای آزمایشگاه است و باید درب قوطی کاملا بسته باشد. از تابش شدید آفتاب جلوگیری شود، در محیط خشک و خنک و رطوبت کمتر از ۶۰ % قرار گیرد.

دستورالعمل

• 68 گرم از پودر را در یک لیتر آب مقطر به طور کامل حل کنید.

• آن را حرارت داده و اجازه دهید به مدت یک دقیقه بجوشد تا کاملا پودر حل شود.

• به مدت ۱۵ دقیقه در ۱۲۱ درجه سانتی گراد اتوکلاو شود.

• از کشت های مشخص و استاندارد جهت کنترل استفاده کنید.

از نام سه شخص، به نام های Man, Rogosa , Sharpe برگرفته شده است؛ که سازنده این محیط کشت هستند. محیط کشت MRS در درجه اول برای کشت لاکتوباسیل ها از منابع مختلف استفاده می شود. این محیط کشت برای اهداف تشخیصی بیماری ها و وضعیت های دیگر مربوط به انسان استفاده نمی شود. محیط کشت MRS حاوی منابع کربن ، نیتروژن و ویتامین ها برای حمایت از رشد لاکتوباسیل ها و موجودات دیگر است. ­ محیط MRS براث واسطه ای برای کشت و شمارش گونه های لاکتوباسیلوس هاست.  این ماده از رشد سرشار همه لاکتوباسیل ها از حفره دهان ، محصولات لبنی ، غذاها، مدفوع و سایر منابع پشتیبانی می کند. برای تعیین اینکه آیا ارگانیسم هنگام تخمیر گلوکز گاز ایجاد می کنند؛ استفاده می شود و برخی از گونه های لاکتوباسیلوس و Leuconostoc در این محیط گاز تولید می کنند.

دستور العمل محیط کشت M.R.S Broth :

• 62 گرم ازمحیط کشت را در 1 ایتر آب مقطر حل کنید.

• در صورت لزوم حرارت می دهیم تا محیط کاملا حل شود.

• با اتوکلاو کردن در فشار 15 پوند (121 درجه سانتیگراد) به مدت 15 دقیقه، محیط را استریل کنید.

• به صورت دلخواه در لوله ، بطری یا فلاسک توزیع کنید.

یک محیط کشت انتخابی و افتراقی برای باکتری ها است. این محیط برای جداسازی انتخابی باسیل های گرم منفی و روده ای (که به طور معمول در دستگاه گوارش یافت می شوند) و نیز تفکیک آن ها بر اساس تخمیر لاکتوز طراحی شده است. تخمیر کننده های لاکتوز روی آگار مک کانکی قرمز یا صورتی می شوند و موارد غیر تخمیر کننده تغییر رنگ نمی دهند. این محیط به دلیل وجود نمک های صفراوی، از رشد ارگانیسم های گرم مثبت جلوگیری می کند و امکان انتخاب و جداسازی باکتری های گرم منفی را فراهم می کند.

دستورالعمل تهیه محیط کشت آگار MacConkey

•  مقدار مشخصی از محیط کشت را در یک لیتر آب تصفیه شده حل کنید.
• ترکیب را کاملاً مخلوط کنید.
• اتوکلاو در دمای 121 درجه سانتیگراد به مدت 15 دقیقه انجام دهید.

یکی از محیط کشت های غنی انتخابی است. این محیط کشت به دلیل نداشتن آگار در ترکیب خود به شکل مایع می باشد. از دیگر ترکیبات موجود در مک کانکی براث می توان به شاخص pH موجود در آن که bromocresol(بروموکرزول) اشاره نمود. باکتری های کشت داده شده در صورت تخمیر لاکتوز موجود در محیط باعث اسیدی شدن آن می شوند. به همین دلیل رنگ محیط از بنفش به زرد تغییر می نماید. این مناسب برای کشت باکتری ها از جمله اشریشیا کلی(E.coli) به عنوان یک محیط کشت غنی و شناسایی و تشخیص کلی فرم ها و باکتری های موجود در شیر و آب مناسب است.

دستورالعمل تهیه محیط کشت مک کانکی براث

•  محیط کشت را در یک لیتر آب تصفیه شده حل کنید.
• ترکیب را کاملاً مخلوط کنید.
• اتوکلاو در دمای 121 درجه سانتیگراد به مدت 15 دقیقه انجام دهید.

یکی از محیط کشت های غنی انتخابی است. این محیط کشت به دلیل نداشتن آگار در ترکیب خود به شکل مایع میاین محیط کشت جهت بررسی حساسیت باکتریهای هوازی یا غیرهوازی اختیاری دارای رشد سریع نسبت به انتشار آنتی بیوتیك ها از طریق دیسك به روش کربی-بائر، به عنوان روش استانداردتایید شده توسطCLSI )موسسه استانداردهای بالینی و آزمایشگاهی (مورد استفاده قرار می گیرد. به دلیل کاربرد فراوان این محیط برای انجام تست های آنتی بیوگرام در آزمایشگاه، کنترل کیفی این محیط امری ضروری و حیاتی است به همین دلیل کنترل کیفی این محیط کشت از اهمیت بالایی برخوردار است.

محیط کشت میکروبی مولر هینتون براث – Mueller Hinton Broth به همراه مولر هینتون آگار برای بالا بردن حساسیت تعداد زیادی از تست های ضد میکروبی به کار می رود. برای تعیین MIC (حداقل غلظت بازدارنده) مثلا برای باکتری هایی که از ادرار جدا می شوند. مولر هینتون همچنین برای کشت Neisseria و میکروارگانیسم های سخت پسند هم به کار می رود. این ماده فرمولی شبیه به مولر هینتون آگار دارد. اما وقتی استفاده می شود که محیط کشت مایع ارجحیت دارد.